Spisu treści:
- Barwienie immunohistochemiczne
- Przepis na bufor PBS
- Co trzeba zrobić, aby bufor PBS
- Jak zrobić bufor PBS
- Wskazówki dotyczące tworzenia bufora PBS
- Zastosowania bufora PBS
Wideo: Dominion (2018) - full documentary [Official] 2024
Sól buforowana fosforanem (PBS) jest roztworem buforowym, który jest powszechnie stosowany do barwienia immunohistochemicznego (IHC) i jest często stosowany w badaniach biologicznych. PBS to wodny roztwór soli zawierający wodorofosforan sodu, chlorek sodu oraz, w niektórych przypadkach, chlorek potasu i diwodorofosforan potasu.
Barwienie immunohistochemiczne
Immunohistochemia odnosi się do procesu wykrywania antygenów, takich jak białka w komórkach fragmentu tkanki, z wykorzystaniem zasady przeciwciał wiążących się specyficznie z antygenami w tkankach biologicznych. Barwienie immunofluorescencyjne było pierwszą metodą barwienia immunohistochemicznego.
Antygeny stają się widoczne po skoniugowaniu z przeciwciałami przy użyciu barwników fluorescencyjnych z powodu reakcji wiązania antygen-przeciwciało. Proces ten zachodzi, gdy jest aktywowany przez ekscytujące światło o określonej długości fali pod mikroskopem fluorescencyjnym.
Osmolarność i stężenia jonów w roztworach odpowiadają stężeniom ludzkiego ciała - są izotoniczne.
Przepis na bufor PBS
Możesz przygotować PBS na kilka sposobów. Istnieje wiele formuł. Niektóre z nich nie zawierają potasu, a inne zawierają wapń lub magnez.
Ten przepis jest stosunkowo łatwy. Jest przeznaczony do 10-krotnego roztworu podstawowego PBS (0,1 M). Możesz jednak stworzyć rozwiązanie podstawowe 1X lub zacząć od tego przepisu 10X i rozcieńczyć go do 1X. Cały proces trwa około 10 minut i zapewniona jest opcja dodawania Tween.
Co trzeba zrobić, aby bufor PBS
- Monozasadowy fosforan sodu (bezwodny)
- Dwuzasadowy fosforan sodu (bezwodny)
- Chlorek sodu
- Łuski i ważenie łodzi
- Mieszadło magnetyczne i mieszadło
- Sonda pH, która została skalibrowana i odpowiednie rozwiązania do regulacji pH
- Kolba miarowa o pojemności 1 litra
- Tween 20 (opcjonalnie)
Jak zrobić bufor PBS
- Odważyć 10,9 g bezwodnego dwuzasadowego fosforanu sodu (Na2HPO4), 3,2 g bezwodnego fosforanu sodu jednozasadowego (NaH2PO4) i 90 g chlorku sodu (NaCl). Rozpuścić w zaledwie 1 litrze wody destylowanej.
- Dostosuj wartość pH do 7,4 i doprowadź roztwór do końcowej objętości 1 l.
- Przed użyciem należy rozcieńczyć 10X i w razie potrzeby wyregulować pH.
- Możesz przygotować roztwór PBS zawierający 0,5% Tween 20, dodając 5ml Tween 20 do roztworu 1L.
Wskazówki dotyczące tworzenia bufora PBS
Przechowuj bufor w temperaturze pokojowej po przygotowaniu roztworu PBS.
Nie-bezwodne odczynniki mogą być podstawione, ale musisz ponownie przeliczyć odpowiednią masę każdego z nich, aby pomieścić dodane cząsteczki wody.
Zastosowania bufora PBS
Sól fizjologiczna buforowana fosforanem ma wiele zastosowań, ponieważ jest izotoniczna i nietoksyczna dla większości komórek. Może być stosowany do rozcieńczania substancji i jest często używany do płukania pojemników z komórkami. PBS może być stosowany jako rozcieńczalnik w różnych metodach do suszenia biomolekuł, ponieważ cząsteczki wody znajdujące się w jego obrębie będą, na przykład, zbudowane wokół substancji-białka. Będzie "osuszony" i unieruchomiony na twardej powierzchni.
Wartość pH pozostaje stała i stała, aby zapobiec zniszczeniu komórek.
Cienka warstewka wody wiążąca się z substancją zapobiega denaturacji lub innym zmianom konformacyjnym. Bufory węglanowe można stosować do tego samego celu, ale z mniejszą skutecznością.
PBS można także wykorzystać do określenia widma referencyjnego podczas pomiaru adsorpcji białka w elipsometrii.
Wskazówki, jak zrobić bloga biznesowego Sukces
Biznesowe blogi mogą wydawać się zastraszające, gdy zaczniesz, ale nie jest to takie trudne. Oto 12 wskazówek, dzięki którym Twój blog odniesie sukces.
8 kroków, które powinieneś zrobić, aby uniknąć złych kredytów
Posiadanie złych kredytów oznacza zajmowanie się odmową podania i wysokimi odsetkami oraz depozytami zabezpieczającymi. Unikaj złych kredytów, wykonując następujące kroki.
Rzeczy, które możesz zrobić, by denerwować współpracowników
Szukasz sposobów na zirytowanie współpracowników? Oto lista rzeczy, które możesz zrobić, by nabrać nerwów kolegów.