Spisu treści:
Wideo: Jak przyspieszyć swój Internet w 5 krokach? 2024
Bufor TBE jest roztworem buforowym utworzonym z zasady Tris, kwasu borowego i EDTA (lub całkowicie z Tris-boranu-EDTA). Ten bufor jest często stosowany do elektroforezy w żelu agarozowym w analizie produktów DNA powstałych w wyniku amplifikacji PCR, protokołów oczyszczania DNA lub eksperymentów klonowania DNA.
Bufor TBE jest szczególnie przydatny do oddzielania mniejszych fragmentów DNA (MW <1000), takich jak małe produkty trawienia enzymem restrykcyjnym. TBE ma większą pojemność buforową i da większą rozdzielczość niż bufor TAE. Bufor TAE jest roztworem złożonym z zasady Tris, kwasu octowego i EDTA (octan Tris-EDTA).
TBE jest generalnie droższy niż TAE i hamuje ligazę DNA, co może powodować problemy, jeśli zamierzone są kolejne etapy oczyszczania i ligacji DNA. Wykonaj trzy proste kroki, aby dowiedzieć się, jak utworzyć bufor TBE. Tworzenie tego bufora nie powinno trwać dłużej niż 30 minut. Oto jak:
Roztwór podstawowy EDTA
Roztwór EDTA (kwas etylenodiaminoczterooctowy) powinien być przygotowany wcześniej. EDTA nie przejdzie całkowicie do roztworu, dopóki pH nie zostanie ustawione na około 8,0. Dla 500-mililitrowego roztworu podstawowego 0,5 M EDTA odważ 93,05 gramów soli disodowej EDTA (FW = 372,2). Następnie rozpuścić w 400 ml dejonizowanej wody i wyregulować pH za pomocą NaOH. Następnie uzupełnić roztwór do końcowej objętości 500 mililitrów.
Roztwór podstawowy TBE
Zrobić stężony (5x) roztwór podstawowy TBE ważąc 54 g zasady Tris (FW = 121,14) i 27,5 g kwasu borowego (FW = 61,83) i rozpuścić w około 900 ml dejonizowanej wody. Następnie dodać 20 mililitrów 0,5 M EDTA (pH 8,0) i doprowadzić roztwór do końcowej objętości 1 litra. Ten roztwór można przechowywać w temperaturze pokojowej, ale w starszych roztworach tworzy się osad. Przechowuj bufor w szklanych butelkach i odrzuć, jeśli utworzył się osad.
Roztwór roboczy TBE
Do elektroforezy w żelu agarozowym można zastosować bufor TBE o stężeniu 0,5x (rozcieńczenie 1:10 stężonego roztworu podstawowego). Rozcieńczyć roztwór podstawowy przez 10x w wodzie dejonizowanej. Końcowe stężenia substancji rozpuszczonej wynoszą 45 mM Tris-boranu i 1 mM EDTA. Bufor jest teraz gotowy do użycia w prowadzeniu żelu agarozowego.
Czego potrzebujesz
Aby utworzyć bufor TBE, potrzebujesz tylko czterech substancji. Pozostałe pozycje na tej liście to sprzęt. Cztery wymagane substancje to sól disodowa EDTA, zasada Tris, kwas borowy i dejonizowana woda.
Jeśli chodzi o sprzęt, będziesz potrzebował odpowiednio miernika pH i standardów kalibracji. Oprócz tego będziesz potrzebował zlewek lub kolb o pojemności 600 mililitrów i 1500 mililitrów. Wyczerpujące zapotrzebowanie na sprzęt to cylindry z podziałką, mieszadła i płytki do mieszania.
Sprawdź inwentarz w laboratorium, z którego będziesz korzystać, aby upewnić się, że masz wszystko, czego potrzebujesz, zanim zaczniesz. Nic nie jest gorsze, niż konieczność zatrzymania się w trakcie przygotowywania rozwiązania, ponieważ wyczerpały się odpowiednie materiały. Jeśli twoje laboratorium jest w szkole lub miejscu pracy, sprawdź u odpowiednich pracowników, czy mają wszystkie przedmioty w magazynie. Może to w końcu zaoszczędzić czas i energię.
Pokonaj giełdę w 3 łatwych krokach
Pokonaj giełdę tymi absurdalnie łatwymi krokami i nie musisz mieć żadnego doświadczenia w finansach, aby to zrobić. Oto jak to działa:
Jak opublikowałem swoją pierwszą książkę krótkich opowiadań w 12 łatwych krokach
"Baby's on Fire" autorka Liz Prato o pisaniu i publikowaniu opowiadań
Dowiedz się, jak zrobić bufor TAE w kilku krokach
Skorzystaj z tych szybkich i prostych instrukcji, jednocześnie przygotowując roztwory podstawowe i robocze buforu TAE (octan tris-EDTA) do elektroforezy żelowej.