Spisu treści:
Wideo: Elektroforeza - trudny wyraz, łatwa analiza / Electrophoresis - Damian Sojka, ADAMED SmartUP 2024
Endonukleazy restrykcyjne to klasa enzymów, które przecinają cząsteczki DNA. Każdy enzym rozpoznaje unikalne sekwencje nukleotydów w nici DNA, zwykle o długości od czterech do sześciu par zasad. Sekwencje są palindromowe, ponieważ komplementarna nić DNA ma tę samą sekwencję w odwrotnym kierunku. Innymi słowy, obie nici DNA są cięte w tym samym miejscu.
Gdzie znajdują się te enzymy
Enzymy restrykcyjne znajdują się w wielu różnych szczepach bakterii, których rolą biologiczną jest udział w obronie komórek. Enzymy te ograniczają obcy (wirusowy) DNA, który dostaje się do komórek, niszcząc je. Komórki gospodarza mają system modyfikacji restrykcyjnej, który metyluje ich własne DNA w miejscach specyficznych dla ich odpowiednich enzymów restrykcyjnych, tym samym chroniąc je przed cięciem. Odkryto ponad 800 znanych enzymów, które rozpoznają ponad 100 różnych sekwencji nukleotydowych.
Rodzaje enzymów restrykcyjnych
Istnieje pięć różnych typów enzymów restrykcyjnych. Typ I tnie DNA w losowych lokalizacjach aż do 1000 lub więcej par zasad z miejsca rozpoznania. Cięcia typu III na około 25 par zasad z witryny. Oba te typy wymagają ATP i mogą być dużymi enzymami z wieloma podjednostkami. Enzymy typu II, które są głównie stosowane w biotechnologii, wycinają DNA w rozpoznawanej sekwencji bez potrzeby ATP i są mniejsze i prostsze.
Enzymy restrykcyjne typu II nazwane są zgodnie z gatunkami bakterii, z których są izolowane. Na przykład enzym EcoRI został wyizolowany z E. coli. Większość społeczeństwa zna epidemie E. coli w żywności.
Enzymy restrykcyjne typu II mogą generować dwa różne rodzaje cięć w zależności od tego, czy wycinają one obydwie nici w środku sekwencji rozpoznawania, czy też każdą nić bliżej jednego końca sekwencji rozpoznającej.
Pierwsze cięcie wygeneruje "tępe końce" bez nawisów nukleotydowych. Ten ostatni generuje "lepkie" lub "spójne" końce, ponieważ każdy otrzymany fragment DNA ma nawis, który uzupełnia inne fragmenty. Obie są użyteczne w genetyki molekularnej do wytwarzania rekombinowanego DNA i białek. Ta forma DNA wyróżnia się, ponieważ jest wytwarzana przez podwiązanie (połączenie ze sobą) dwóch lub więcej różnych nici, które pierwotnie nie były ze sobą połączone.
Enzymy typu IV rozpoznają zmetylowany DNA, a enzymy typu V wykorzystują RNA do cięcia sekwencji na inwazyjnych organizmach, które nie są palindromami.
Użyj w biotechnologii
Enzymy restrykcyjne są wykorzystywane w biotechnologii do cięcia DNA na mniejsze nici w celu zbadania różnic długości fragmentów między osobnikami. Jest to nazywane polimorfizmem długości fragmentów restrykcyjnych (RFLP). Są również używane do klonowania genów.
Techniki RFLP zostały użyte do ustalenia, że osoby lub grupy osób mają wyraźne różnice w sekwencjach genów i wzorcach cięcia restrykcyjnego w pewnych obszarach genomu. Znajomość tych wyjątkowych obszarów jest podstawą odcisków palców DNA. Każda z tych metod zależy od zastosowania elektroforezy w żelu agarozowym do rozdziału fragmentów DNA. Bufor TBE, który składa się z zasady Tris, kwasu borowego i EDTA, jest powszechnie stosowany do elektroforezy w żelu agarozowym w celu zbadania produktów DNA.
Użyj w Klonowaniu
Klonowanie często wymaga wstawienia genu do plazmidu, który jest typem fragmentu DNA. Enzymy restrykcyjne mogą wspomóc proces ze względu na jednoniciowe nawisy, które opuszczają podczas cięcia. Ligaza DNA, oddzielny enzym, może łączyć ze sobą dwie cząsteczki DNA o pasujących końcach.
Tak więc, stosując enzymy restrykcyjne z enzymami ligazy DNA, fragmenty DNA z różnych źródeł można wykorzystać do stworzenia pojedynczej cząsteczki DNA.
Wszystko o armii Dodatkowe identyfikatory umiejętności
W armii "ASI" oznacza "Dodatkowy indentyfikator umiejętności". ASI pokazują dodatkowe umiejętności, trening i kwalifikacje, które może posiadać żołnierz.
Wszystko, co musisz wiedzieć o odliczeniach płacowych
Co musisz wiedzieć o odpisach płacowych? Dostępne są w dwóch smakach, dobrowolne i mimowolne, a niektóre są wymagane zgodnie z prawem. Dowiedz się więcej.
Wszystko, co musisz wiedzieć o franszyzach
Franchising jest tym, w jaki sposób w Stanach Zjednoczonych każdego dnia odbywa się Wielki Amerykański Sen o niezależnym biznesie.